Tutto sulla polvere di Crizotinib

  1. Cosa è la polvere di Crizotinib?
  2.Come funziona la polvere di Crizotinib?
  3. Crizotinib in polvere Materiali e metodi
  4.Approvagli e indicazioni per la polvere di Crizotinib
  5. Sperimentazioni cliniche per la polvere di Crizotinib
  6.La conclusione della polvere di Crizotinib
  7. Dove acquistare Crizotinib in polvere?


Video in polvere Crizotinib


I.Crizotinib in polvere personaggi di base:

Nome e Cognome: Crizotinib in polvere
CAS: 877399-52-5
Formula molecolare: C21H22Cl2FN5O
Peso molecolare: 450.343
Punto di fusione: 197-203 ° C
Temp. Di memorizzazione: RT
Colore: polvere da bianca a giallo pallido


1. Cosa è la polvere di Crizotinib?aasraw

Crizotinib in polvere(nome commerciale Xalkori, Pfizer) è un farmaco antitumorale che agisce come un ALK (linfoma chinasi anaplastico) e inibitore ROS1 (c-oncogene 1), approvato per il trattamento di alcuni carcinoma del polmone non a piccole cellule (NSCLC) negli Stati Uniti e alcuni altri paesi, e sottoposti a studi clinici che ne testano la sicurezza e l'efficacia nel linfoma anaplastico a grandi cellule, nel neuroblastoma e in altri tumori solidi avanzati sia negli adulti che nei bambini.

La polvere di Crizotinib è un agente antitumorale che agisce come inibitore della linfoma chinasi anaplastico e recentemente approvato per il trattamento del carcinoma polmonare non a piccole cellule. L'analisi retrosintetica di questa molecola porta chiaramente i nostri occhi a due blocchi principali, come descritto nello Schema 1, essendo l'etanolo racemo 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenile) è un obiettivo molto interessante per le biotrasformazioni. In effetti, alcuni gruppi di ricerca hanno già riportato i loro risultati sugli approcci biocatalitici o di biotrasformazione per arrivare sull'intermedio desiderato.


2.Come funziona La polvere di Crizotinib funziona?aasraw

La polvere di Crizotinib ha una struttura aminopiridina e funziona come un inibitore della protein-chinasi mediante un legame competitivo all'interno della tasca legante ATP delle chinasi target. Circa 4% dei pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule ha un riarrangiamento cromosomico che genera un gene di fusione tra EML4 ('4 protein-like similodermico-associato a echinoderma') e ALK ('linaplastica chinasi anaplastica'), che risulta nella chinasi costitutiva attività che contribuisce alla carcinogenesi e sembra guidare il fenotipo maligno. L'attività della chinasi della proteina di fusione è inibita dalla polvere di Crizotinib. I pazienti con questa fusione genica sono tipicamente giovani non fumatori che non presentano mutazioni nel gene del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) o nel gene K-Ras. Il numero di nuovi casi di NSLC ALK-fusione è di circa 9,000 all'anno negli Stati Uniti e su 45,000 in tutto il mondo.

Le mutazioni ALK sono ritenute importanti nel guidare il fenotipo maligno in circa 15% dei casi di neuroblastoma, una forma rara di cancro del sistema nervoso periferico che si verifica quasi esclusivamente nei bambini molto piccoli.

La polvere di Crizotinib inibisce la tirosina chinasi del recettore del fattore di crescita (HGFR) c-Met / epatocita, che è coinvolta nella oncogenesi di una serie di altre forme istologiche di neoplasie maligne.

La polvere di Crizotinib è attualmente pensata per esercitare i suoi effetti attraverso la modulazione della crescita, la migrazione e l'invasione delle cellule maligne. Altri studi suggeriscono che la polvere di Crizotinib potrebbe anche agire attraverso l'inibizione dell'angiogenesi nei tumori maligni.

Al fine di ottenere il derivato chirale 1-feniletanolo, Liang e colleghi hanno utilizzato diversi microrganismi per ridurre efficacemente il chetone verso l'intermedio. Altri gruppi hanno cercato di aumentare l'efficienza e la selettività verso l'intermedio chirale utilizzando approcci simili. Un percorso adatto allo scopo pubblicato da Koning e collaboratori di Pfizer rivela la strategia per produrre l'alcol racemo mediante riduzione tradizionale di NaBH4, seguita da acetilazione, risoluzione mediata da PLE e inversione di Mitsunobu verso l'enantiomero richiesto.

Le lipasi sono sempre la prima opzione quando si pensa di ottenere alcoli chirali puri altamente enantiomeri mediante risoluzioni cinetiche o metodi di risoluzione cinetica dinamica (DKR). Inoltre, le lipasi possono essere combinate con i catalizzatori di racemizzazione, vale a dire complessi di palladio, iridio, vanadio o complessi di rutenio. Sfortunatamente, per quanto ne sappiamo, non sono stati trovati resoconti di lipasi usate sulla cinetica o DKR di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo.

Nel nostro continuo sforzo verso lo sviluppo di protocolli biocatalitici per la sintesi di intermedi per sintesi API, nel presente documento riportiamo i nostri studi sulla cinetica e DKR di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo, un importante intermedio sulla polvere di Crizotinib sintesi.


3.Materiali in polvere Crizotinib E metodiaasraw

Nome e Cognome: Crizotinib in polvere
CAS: 877399-52-5
Formula molecolare: C21H22Cl2FN5O
Peso molecolare: 450.343
Punto di fusione: 197-203 ° C
Temp. Di memorizzazione: RT
Colore: polvere da bianca a giallo pallido

1- (2,6-Dichloro-3-fluoro-fenil) -etanolo e isopropenil acetato acquistati da Sigma-Aldrich. Candida antarctica lipasi B (CAL B) acquistata da Novozymes. Tutti gli altri materiali erano almeno di grado reagente.

  • Reazioni di risoluzione cinetica

La miscela di reazione è stata composta da una soluzione 3 mL di 0.048 mmol 1- (2,6-dicloro-3-fluoro-fenil) -etanolo, 0.096 mmol acil donatore e 60 mg di enzima (20% p / v) in solvente. Le reazioni di screening sono state eseguite in piastre di carburo di silicio a temperature di 60-80 ° C, sotto agitazione magnetica per ottenere 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etil acetato (1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.26 (dd, J = 8.3, 5.6 Hz, 5H), 7.03 (t, J = 8.5 Hz, 3H), 6.39 (q, J = 7.1 Hz, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.66 (d, J = 6.9 Hz, 3H) Al fine di esaminare l'influenza dei diversi componenti del mezzo di reazione, sono stati valutati enzimi, solvente, donatore di acile e temperatura.Una aliquota 20 μL è stata trasferita in una nuova fiala e 980 μL di etil acetato è stato aggiunto ed analizzato nel GC -FID.

  • Reazioni di dinamica cinetica (DKR) in flusso continuo

Gli esperimenti di flusso continuo sono stati eseguiti utilizzando un sistema di flusso dell'Asia (Syrris) che includeva una pompa a siringa, un riscaldatore e una colonna di vetro. La colonna di vetro era imballata alternativamente con CAL B e VOSO4.XH2O immobilizzati. Un reattore 10 confezionato in mL con strati di enzima 4 (ogni strato contenente 500 mg del catalizzatore) e strati 3 di VOSO4.XH2O (ciascuno strato contenente 500 mg del catalizzatore) separato da strati sottili di cotone è stato ottenuto. Il reattore impaccato al letto è stato riscaldato a 80 ° C e perfuso con isoottano a una velocità di 1.0 mL.min 1. Le continue reazioni di flusso sono state effettuate pompando una soluzione di isoottano (15 mL) di 1- (2,6-dicloro-3-fluoro-fenil) -etanolo (0.1 M) e vinil acetato come donatore di acile (0.1 M) attraverso il letto confezionato reattore alle portate di 0.1, 0.5 e 1.0 mL.min? 1, che corrispondono ai tempi di residenza di 100, 50 e 10 min, rispettivamente. A causa del lungo tempo di reazione in batch, la soluzione è stata riciclata nel flusso continuo per ottimizzare i risultati di conversione. Aliquote di 20 μL sono state prelevate dall'uscita del reattore dopo aver pompato la soluzione reattiva per due volte il tempo di permanenza e dopo 21 h. Successivamente, le aliquote sono state diluite con etil acetato in soluzione 1.0 mL e analizzate mediante GC-FID.

  • Analisi cromatografica

Risoluzione cinetica e risoluzione cinetica dinamica
1- (2,6-Dichloro-3-fluorofenil) -etanolo GC-FID: (Shimadzu CG2010 - colonna capillare chirale Gamadex - 225) I campioni 8 μL sono stati iniettati a 117 ° C. Il forno è stato riscaldato a 2 ° C / min a 150 ° C quindi mantenuto per 5 min e a 30 ° C / min a 200 ° C e quindi mantenuto per 1 min, con un flusso 3.0 ml / min e una modalità di iniezione Split (Rapporto: 20: 1).

  • risultati e discussioni

Sulla base della nostra precedente esperienza sulle risoluzioni cinetiche dei derivati ​​del sec-feniletanolo, abbiamo imparato in questi anni che gli alcoli arilici orto-sostituiti sono meno reattivi per la risoluzione cinetica. Poiché 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2) contiene sostituenti su entrambe le posizioni orto, ci aspettavamo lunghi tempi di reazione per questa trasformazione. Abbiamo iniziato esaminando l'influenza del donatore acilico sull'esito della reazione quando si utilizza CAL B (N435) immobilizzato in commercio a 60 ° C e cicloesano come solvente per i giorni 10 (Tabella 1).

Valutazione del donatore di acile per la risoluzione cinetica di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2) mediata da CAL-B immobilizzato.

Ingresso Acyl Donor (1 eq) Conv. (%) eeprod (%) E

  • 1 Isopropenyl acetate 44 99> 200
  • 2 Etile acetato 32 99> 200
  • 3 Vinil acetato 26 95 54

Condizioni di reazione: 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) -etanolo (2) (0.048 mmol, 10mg), isopropenil acetato o vinil acetato o etilacetato (1eqv) come donatore di acile e 60mg (20% p / v) di CAL B Novozym 435 (N435) in cicloesano (3 mL) per 10 giorni a 60 ° C, misurato mediante metodo GC-FID e l'enantioselettività è stata misurata sulla base di (S) -1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo e i corrispondenti tempi di ritenzione degli esteri.



4.Approvagli e indicazioni per la polvere di Crizotinibaasraw

In agosto 26, 2011, la Food and Drug Administration statunitense ha approvato la polvere di Crizotinib (Xalkori) per il trattamento di alcuni tumori polmonari non a piccole cellule di stadio avanzato (localmente avanzato o metastatico) che esprimono il gene anormale del linfoma-chinasi anaplastico (ALK). L'approvazione richiedeva un test molecolare complementare per la fusione EML4-ALK. A marzo 2016, la Food and Drug Administration statunitense ha approvato la polvere di Crizotinib nel carcinoma polmonare non a piccole cellule positivo per ROS1.

Come previsto, l'isopropenilacetato porta ai migliori risultati sulla risoluzione cinetica di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2), arrivando sul desiderato enantiomero R acetilato in buone conversioni e alta selettività (Tabella 1, voce 1). L'acetato di vinile era probabilmente troppo reattivo nelle condizioni di reazione progettate, portando ad una diminuzione del rapporto enantiomerico. È stato eseguito un esperimento in bianco per valutare la reazione non catalizzata e potrebbero essere ottenute piccole quantità di alcol acetilato (<10%). Per quanto riguarda l'acetato di etile, sorprendentemente, ha presentato un'interessante selettività con una conversione moderata (Tabella 1, voci 3 e 2 rispettivamente). Nonostante il fatto che Table 1 presenti i risultati per la risoluzione cinetica dopo 10 giorni, le reazioni sono state monitorate nei primi giorni 3 ogni 12 h e dopo il giorno 3rd, ogni 24 h. Quello che potrebbe essere visto è il miglioramento della conversione lungo i giorni fino a 10 giorni di reazione. È stato anche valutato un ulteriore tempo di reazione (giorni 12) ma non è stato osservato alcun miglioramento della conversione.

Per cercare di ridurre il tempo di reazione, una delle strategie era di valutare l'effetto di proporzioni più elevate di donatore acilico, ma sfortunatamente con valori superiori a due equivalenti il ​​rapporto enantiomerico è sceso da> 200 a 31, dimostrando che l'esterificazione chimica sta prendendo posto. Un altro tentativo è stato quello di schermare altre lipasi, ma non sono stati trovati risultati migliori rispetto al CAL B immobilizzato (N435) (Tabella S1 - Informazioni di supporto).

Per cercare di ridurre il lungo tempo di reazione ottenuto per questo specifico substrato, sono state valutate diverse temperature e solventi.

Screening solvente per la risoluzione cinetica di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo, utilizzando isopropenil acetato mediato da CAL B. immobilizzato

Immissione T (° C) Tempo di solvente (giorni) Conv. (%) eeprod (%) E

  • 1 60 ACN 5 2 99> 200
  • 2 60 Acetone 5 nd nd
  • 3 60 MTBE 5 e nd
  • 4 60 Toluene 5 11 99> 200
  • 5 60 Hexane 6 nd nd
  • 6 60 Heptane 6 39 99> 200
  • 8 70 Isooctane 5 45 99> 200
  • 9 75 Isooctane 5 40 99> 200
  • 10 80 Isooctane 5 44 99> 200

Condizioni di reazione: 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2) (0.048 mmol, 10mg), isopropenilacetato (2eqv) come acyl donor e 60mg (20% w / w) Novozym 435 in diversi solventi (3 mL, ACN - acetonitrile, MTBE - metil ter-butil etere), misurati con il metodo GC-FID e l'enantioselettività è stata misurata sulla base di (S) -1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo e dei corrispondenti tempi di ritenzione di estere.

Come osservato sulla Tabella 2, tra tutti i solventi valutati per la risoluzione desiderata, l'isoottano ha presentato i migliori risultati in termini di tempo di reazione. Nelle condizioni studiate, a 70 ° C, isoottano potrebbe portare a 45% di conversione (resa 42%) dopo 5 giorni, una riduzione 50% sul tempo di reazione (Tabella 2, voce 7). Altri solventi come acetone, MTBE, acetonitrile (ACN), toluene ed esano, hanno fallito o portano a conversioni molto povere. A temperature più elevate, non è stato possibile osservare alcun miglioramento nella conversione della reazione. Un'eccezione è l'eptano, che potrebbe portare a risultati simili a isoottano, ma la successiva può portarci ad una migliore stabilità per l'enzima immobilizzato.

Nonostante i buoni risultati ottenuti in condizioni di risoluzione cinetica, 50% del prodotto è uno spreco o deve essere racemizzato per poter essere riutilizzato in un'altra campagna.

Sulla base dei risultati ottenuti per la risoluzione cinetica di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2), abbiamo deciso di andare avanti al fine di sviluppare un metodo per il DKR che dovrebbe fornire il desiderato R-enantiomero acetilato di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2) come prodotto principale. Questa strategia si basa sul fatto che dopo DKR, una semplice idrolisi conduce all'enantiomero desiderato, che può essere accoppiato con la catena laterale attraverso la procedura di sostituzione aromatica nucleofila standard. Per questo scopo sono stati testati due diversi catalizzatori di racemizzazione, il vanadil solfato19-25 e il catalizzatore di rutenio di Shvo.26-30

Le reazioni sono state condotte a 70 ° C, usando isopropenilacetato come donatore di acile e la conversione analizzata da GC-FID giornalmente durante i giorni 5. È importante notare che i donatori di acile a catena corta non sono la scelta migliore per la DKR mediata dai catalizzatori al vanadio, come già riportato da altri gruppi.20,22 Nonostante ciò, abbiamo deciso di mantenere l'isopropenil acetato poiché sappiamo già che la risoluzione cinetica dovrebbe essere la il processo di limitazione della velocità del nostro processo e un donatore di acile a catena lunga, come il vinile decanoato, potrebbe aumentare ancora di più il tempo di reazione. 31 I risultati ottenuti per la risoluzione cinetica dinamica sono presentati su Tabella 3.

DKR di 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2) mediato da CAL-B immobilizzato e diversi catalizzatori di racemizzazione in condizioni di batch.

Ingresso Racemization Catalyst Conv. (%) eeprod (%) Selettività (%)

  • 1 VOSO4 30 98> 99
  • 2 Shvo 35 92> 99

Condizioni di reazione: 1- (2,6-dicloro-3-fluoro-fenil) -etanolo (0,1 M), isopropenilacetato (0,1 M) come donatore di acile, in isoottano (15 mL) sono stati trasportati miscelando tutti i reagenti e i catalizzatori su un lotto reattore. Determinato da GC-FID e enantioselettività è stato misurato sulla base di (S) -1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo e dei corrispondenti tempi di ritenzione di estere.


5.Clinici clinici per la polvere di Crizotinibaasraw

La polvere di Crizotinib ha causato il restringimento o la stabilizzazione dei tumori nel 90% dei pazienti 82 portatori del gene di fusione ALK. I tumori hanno ridotto di almeno il 30% in 57% di persone trattate. La maggior parte aveva adenocarcinoma e non aveva mai fumato o erano ex fumatori. Avevano subito un trattamento con una media di altri tre farmaci prima di ricevere la polvere di Crizotinib e solo il 10% avrebbe dovuto rispondere alla terapia standard. Sono stati somministrati 250 mg di Crizotinib in polvere due volte al giorno per una durata mediana di sei mesi. Circa il 50% di questi pazienti ha riportato almeno un effetto collaterale, come nausea, vomito o diarrea. Alcune risposte alla polvere di Crizotinib sono durate fino a 15 mesi.

Uno studio di fase 3, PROFILE 1007, confronta la polvere di Crizotinib con la chemioterapia di seconda linea standard (pemetrexed o taxotere) nel trattamento del NSCLC ALK-positivo. Inoltre, uno studio di fase 2, PROFILE 1005, studia i pazienti che soddisfano criteri simili che hanno ricevuto più di una linea di chemioterapia precedente.

La polvere di Crizotinib viene anche testata in studi clinici su linfoma anaplastico a grandi cellule disseminato avanzato e neuroblastoma.

A febbraio 2016 lo studio J-ALEX di fase III che confrontava alectinib con NSCLC metastatico metastatico in polvere di Crizotinib è stato concluso in anticipo perché un'analisi ad interim ha dimostrato che la sopravvivenza libera da progressione era più lunga con alectinib. Questi risultati sono stati confermati in un'analisi 2017.

Come si può osservare sulla Tabella 3, il protocollo di racemizzazione eseguito con catalizzatore Shvo o vanadil solfato, porta a conversioni moderate verso l'alcol chirale desiderato. È importante notare che nelle condizioni di reazione studiate, il catalizzatore di Shvo non ha funzionato meglio di VOSO4, presentando anche una diminuzione dell'eccesso enantiomerico del prodotto, dimostrando che VOSO4 potrebbe essere un'alternativa interessante e più economica per ulteriori miglioramenti. 19-25,32- 34

In seguito ai nostri recenti studi sull'uso di VOSO4 per DKR in condizioni di flusso continuo 31 abbiamo applicato le condizioni di reazioni già ottimizzate per sec-feniletanolo al nostro substrato 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo. In questo modo, la reazione è stata eseguita in un sistema a circuito chiuso a causa dell'elevato tempo di reazione necessario per la fase di risoluzione cinetica. Sebbene non abbiamo osservato alcuna incompatibilità tra CAL B e VOSO4,19-25,32-34 come precedentemente riportato da altri autori, un reattore a flusso continuo a letto pieno è stato progettato in modo che quattro strati dell'enzima immobilizzato e tre strati di VOSO4 fossero disposti alternativamente lungo un colonna di vetro e fisicamente separati da un sottile strato di cotone. I risultati ottenuti con tempi di reazione e portate diversi sono presentati di seguito (Tabella 4).

Polvere Crizotinib cruda (877399-52-5) hplc≥98% | Reagenti R &amp; S di AASraw

DKR a flusso continuo di etanolo 1- (2,6-dicloro-3-fluorofenile).

Portata entrata (mL.min? 1) Tempo di reazione (giorni) Conv. (%) eeprod (%)

  • 1 1.0 1 28 98
  • 2 3 38 98
  • 3 5 44 98
  • 4 0.5 1 32 98
  • 5 3 47 96
  • 6 5 57 96
  • 7 0.1 1 33 88
  • 8 3 47 84
  • 9 5 47 82

Condizioni di reazione: 1- (2,6-dicloro-3-fluoro-fenil) -etanolo (2) (0,1 M), isopropenilacetato (0,1 M) come donatore di acile, in isoottano (15 mL) sono stati effettuati pompando attraverso il letto reattore imballato a diverse portate. La colonna di vetro è stata confezionata con N435 immobilizzato e VOSO4.XH2O alternatamente in modo che un reattore 10 confezionato in mL con gli strati 4 di enzima (ogni strato contenente 500 mg del catalizzatore) e gli strati 3 di VOSO4.XH2O (ogni strato contenente 500 mg del catalizzatore) separati da sottili strati di cotone. Il reattore impaccato al letto è stato riscaldato a 80 ° C. Determinato da GC-FID e enantioselettività misurata in base a (S) -1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo e ai corrispondenti tempi di ritenzione degli esteri.

I risultati presentati su Tabella 4 mostrano che in condizioni di flusso continuo il DKR mediato da Novozyme 435 e VOSO4, è più efficiente in termini di tempo di conversione e di reazione rispetto al set-up del lotto, come osservato nella voce 6 (Tabella 4) . Non è stato osservato alcun ulteriore miglioramento nella conversione della reazione aumentando il tempo di reazione, che sembra essere una limitazione in questo caso specifico. Aumentando il tempo di permanenza utilizzando basse portate non si ottiene una migliore conversione e si può osservare una piccola diminuzione dell'eccesso enantiomerico del prodotto (voci 7-9, Tabella 4). A 0.5 mL.min? 1 si può ottenere un miglioramento significativo della conversione della reazione rispetto al processo discontinuo, è importante notare che nonostante la reazione sia stata eseguita per i giorni 5, il tempo effettivo di contatto tra reagenti e catalizzatori è molto meno poiché funziona su un sistema a ciclo chiuso. Un altro vantaggio di DKR è il fatto che il materiale di partenza rimanente è stato racemo in grado di essere riutilizzato in una campagna diversa senza ulteriore purificazione.


6.La conclusione della polvere di Crizotinibaasraw

In conclusione abbiamo sviluppato approcci diversi verso la produzione di 1 chirale (2,6-dicloro-3-fluorofenil) etanolo (2), un importante intermedio per la sintesi di Crizotinib in polvere (1). La risoluzione cinetica è stata ottenuta con ottime conversioni e alta selettività, mentre la risoluzione cinetica dinamica, anche in condizioni di batch, ha fornito scarsi risultati di conversioni con un buon eccesso enantiomero del prodotto. Ulteriori miglioramenti sono stati ottenuti traducendo la risoluzione cinetica dinamica in un protocollo a flusso continuo in cui la conversione potrebbe essere migliorata con una buona selettività.


7. Dovunque Acquista la polvere di Crizotinib?aasraw

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